生物制品和細胞治療企業已越來越多地采用核酸法進行支原體的檢查和生產質控。核酸法如替代藥典方法，則需進行方法驗證。

德國MB公司出品有一系列常見支原體或支原體基因組DNA的標準品，包括靈敏度標準品（10CFU,100CFU）、特異性標準品以及PCR定量標準品，其中靈敏度標準品也可用于耐用性的驗證。

MB廠家具有ISO 9001和ISO 13485質量體系認證。每個批次支原體標準品都有驗證和質控。同時支原體培養所用的培養基每個批次都符合歐洲藥品質量管理局（EDQM）的標準。標準品每個批次都提供有質控證書（COA）。標準品所用的支原體菌株來自英國NCTC菌種保藏中心，同時具有相應的ATCC編號。

下面對MB廠家的三類標準品的質控方面做一介紹。

（一）支原體靈敏度標準品

10CFU™支原體靈敏度標準品為滅活支原體，這樣不會對實驗室造成支原體污染。它用于核酸法的靈敏度和耐用性驗證。它每盒含3管10CFU支原體凍干粉，2管陰性對照。靈敏度標準品主要經過下列三方面的質控：

1. 功能檢測：

即標準品復溶后作DNA抽提（采用MB公司的Venor®GeM Sample Preparation Kit），再用符合藥典標準的qPCR試劑盒檢測，應保證有擴增曲線。

2. 活力檢測：

即標準品在培養基中復溶并培養7天后，再進行DNA抽提和qPCR檢測，Ct值和對照組比，應不超過允許閾值（ΔCt >2）。該檢測主要是確保支原體均已滅活。

3.低閾限檢測和批次合格標準：

標準品用DMEM+5%FCS進行10倍梯度稀釋，形成3個稀釋度，DNA抽提后然后進行前后3輪qPCR檢測，每輪每個稀釋度重復8次。每種支原體的Ct平均值應達到一定標準，方為合格。

（二）支原體基因組DNA——特異性驗證用

該基因組DNA是從相應的支原體中抽提出來，并制成凍干粉。每管為10ng左右。復溶時，每管加100ml廠家提供的Tris緩沖液，室溫靜置5分鐘，再渦旋離心5秒鐘。

廠家對基因組中的16S rRNA  pian段進行了序列分析，要求應與相應支原體物種的同源性應達到99%以上。對制備的DNA質量和數量進行了熒光分析和PCR擴增。PCR擴增應顯示為單一的擴增條帶。

（三）PCR定量標準品

每管為1x10⁸拷貝的支原體物種基因組DNA凍干粉，使用時也是先用廠家提供的Tris緩沖液復溶。質控時，對16S rRNA的部分序列進行測序分析，以鑒定支原體物種，測序結果應顯示為99%以上的同源性。再對該標準品作系列梯度稀釋，再進行qPCR擴增，應顯示為良好的線性。該方法還可確定qPCR方法的檢測閾值。

圖. 肺炎支原體DNA定量標準品梯度稀釋后的擴增曲線。DNA的量為2X10⁵——2個拷貝。

MB公司的上述三類標準品可用于對支原體核酸法的方法學驗證，包括靈敏度、特異性和耐用性。其中，基因組DNA除了包括常見支原體物種外，還包括一些常見細菌，用于驗證常規PCR或qPCR的檢測是否會產生交叉反應。

總之，良好的質控是標準品品質的保證，這樣才能確保方法驗證結果的可靠性，使支原體的核酸法檢測符合藥典所規定的標準，從而為替代培養法等經典支原體的檢測方法提供數據支持。

如您對德國MB公司的支原體標準品或檢測試劑盒感興趣，歡迎聯系MB公司中國區總代理上海締一生物生物或北京締一生物科技有限公司。

德國MB公司，全稱Minerva Biolabs，是世界著名的微生物污染控制公司，成立于1999年，總部位于德國柏林。MB公司具有ISO 9001和ISO 13485體系認證。

公司創始人來自于聞名的羅伯特•科赫微生物研究所。

二十年來，MB公司專注于微生物污染檢測與清除，

特別是支原體和軍團菌的技術和產品，在世界上領xian。

* 自1999年起即研發細胞培養和生物藥工業用QC檢測試劑

* 配備生物安全二級實驗室

* GMP級潔凈車間生產

* 世界大的支原體PCR檢測試劑供應商

* IOM和PDA成員

* ISO 9001和ISO 13485認證

注：IOM全稱Institute of Medicine

PDA全稱Parenteral Drug Association

2007年，上海締一生物生物科技有限公司作為MB公司的全國總代理，將支原體檢測防控的優xiu產品引入中國。十幾年來，不斷為中國生物研究實驗室，以及眾多生物制藥企業，提供了完整高效的支原體等微生物檢測及祛除解決方案。